北美黄连有效成分的提取分离与含量测定

北美黄连莲Hydrastis canadensis又称白毛莨，为多年生草本植物，原产于加拿大和美国东部地区。其干燥根与根茎入药．根茎亮黄色，多节；茎黄色，有绒毛及平行而不规则的结节。该植物药先后两次被美国药典收录（1830年，1860～1926年），后来又被法国等13个国家药典相继收入。

1、化学成分及应用概况

北美黄连的药用价值主要由于高含量的异喹啉类生物碱，包括北美黄连碱（hydras tine）、小檗碱（berberine）、北美黄连次碱（hydrastinine）、坎那定（canadine）、canadaline等。此外还含有罂粟素、绿原酸、植物甾醇、树脂、挥发油等成分。

北美黄连有抗菌消炎、收敛止血、愈伤、利胆的作用，在北美广泛用于消除呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜炎症。已开发出各种制剂，内服可用于胃肠炎、胃酸过少、胃溃疡、消化不良、上呼吸道感染、月经过多和子宫颈出血；外用治疗牛皮癣、痔疮、鹅目疮或创伤，洗液可用于阴道炎、白带过多，含漱剂用于牙龈炎、口腔溃疡，洗服液用于结膜炎等。

2、主要有效成分的分离精制

笔者根据文献报道，用适当溶剂提取了北美黄连中的有效成分北美黄连碱和盐酸小檗碱，并用住层析加以分离。

北美黄连干燥根茎粉碎，用乙醇加热提取，提取物用氯仿回流，过滤。滤液回收氯仿，真空干燥．少量氛仿溶解，上硅胶拄，氯仿-甲醇梯度洗脱．TLC定性．合并与对照品北美黄连碱相同部位，回收溶剂，析出晶体。乙酸乙酯-乙烷重结晶，得无色片状晶体I（mp130℃～132℃。滤渣干燥．95%乙醇-水（1：1）溶解．盐酸调pH=2，放置析出黄色针状结晶，乙醇-水重结晶，得晶体Ⅱ。

北美黄连干燥根茎粉碎，乙酸乙酯-乙烷混合溶剂回流提取，过滤．有机层水洗至中性，回收溶剂，固体物用无水乙醇、乙酸乙酯-乙烷多次重结晶，得晶体Ⅲ（mp130℃～132℃）。滤渣用95％乙醇回流提取，过滤，回收乙醇，加适量水，浓盐酸调pH=2，放置析出黄色针晶，乙醇-水重结晶，得晶Ⅳ。

将晶Ⅰ、晶Ⅲ与北美黄连碱对照品点于GF254硅胶板上，氯仿-甲醇（97：3）展开。在紫外254nm。下出现同样的紫色斑点（Rf 值为0.50），混合点样也只有一个斑点。

用HPLC法精制，选用Hylperil ODS，柱；流动相为3:7的乙腈与15％乙腈-85％0.01mol／mlSDS，流速0.8mL／min，检测波长300nm。晶Ⅰ、晶Ⅲ分别加人定量的北美黄连碱对照品；晶Ⅱ、晶Ⅳ分别加入定量的盐酸小檗碱对照品混合进样，均只有一个峰，回收率均在99.0%～101.0％范围内。结合上述实验认为晶Ⅰ、晶Ⅱ是北美黄连碱；晶Ⅱ、晶Ⅳ是盐酸小檗减。含量分析实验得北美黄连碱含量为99.60%，盐酸小檗碱含量为99。1％。

文献报道，采用乙醚-乙醇两步提取法可直接从北美黄连中获得北美黄连域及盐酸小檗碱，但乙醚作提取溶媒难以实现工业化生产。笔者选用乙酸乙酯作为主溶剂直接提取北美黄连碱，含量约为80％，多次重结晶后含量达98％。与文献法比较，本实验方法有操作简单（直接提取2～3h，文献法需26h），收率相近（直接提取1.6％，文献为1.9％），纯度高等特点。

3主要有效成分的含量测定

HPLC色谱条件与精制相同。北美黄连药材粉末250mg置于索氏提取器中，用甲醇提取2h，甲醇定容至50mL容量瓶内，微孔德膜过滤即为供试液。0.2mg／mL的北美黄连碱对照品溶液与0.5mg／mL的盐酸小檗碱对照品溶液及供试液各10μL分别进样，面积外标法计算含量。

北美黄连碱与盐酸小檗碱对照品溶液按不同量进样，回归方程分别为：Y=5.84×105+3440,r＝0.9816（北美黄连碱）；Y＝4.15×106＋3210，r=0.9913（盐酸小檗碱）。

在回收率实验中，样品中分别加人2000、4000和6000μg的北美黄连碱对照品，测出里分别为1960、3720和5860μg，平均回收率为96.22％，RSD为2.91％；样品中分别加入2300、4600和6900μg的盐酸小檗碱对照品，测出量分别为2220、4510和6630μg，平均回收率为96.88％，RSD为1.06％。

综上所述，由于北美黄连在国外广泛应用，因而在我国也具有广阔的生产与应用前景。通过对其有效成分的分离与测定，希望对其深入研究起到一定的参考作用。