多肽物质分子量检测技术

随着分子生物学和生物技术的飞速发展，具有高生物活性的多肽类化合物的分离、纯化和分析已显得尤为突出。许多分离、纯化和分析技术都是以分子量的大小为手段的，现将我们采用的几种主要的技术介绍如下：凝胶过滤测相对分子量该技术即凝胶过滤层析，也称分子排阻层析或凝胶渗透。利用凝胶过滤可以把蛋白质多肽类混合物按分子量的大小分离出来。当不同分子大小的蛋白质多肽类混合物流经凝胶层析柱时，由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。

该方法简单，不要求复杂的仪器就可较准确地测出蛋白质多肽的相对分子量。另外，利用该技术测Mr（相对分子量）还有一个优点，即待测物可以不纯。

该技术一般采用交联葡聚糖为基质，其商业名称为Sephadex。根据需要可选用SephadexG－25（分级分离的Mr范围5000以下）、SephadexG－75（Mr范围3000～80000）、SephadexG－100(Mr范围4000～150000)。实验时，以蛋白质标准的分子量对数值为纵坐标、洗脱体积为横坐标作标准曲线。根据待测品的洗脱体积从标准曲线上查出它的Mr。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测相对分子量在聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS）和少量巯基乙醇，蛋白质多肽类混合物的电泳迁移率将主要取决于它们的相对分子量，而与电荷和形状无关。

目前，对于小分子多肽的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，选择合适的系统及合适的分离胶、浓缩胶甚至是间隙胶的浓度和交联度一直是人们研究的热点。另外，应选择合适的蛋白质标准分子量范围，使得待测品的分子量能落在此范围内。

实验测定时，以各种标准蛋白质的Mr的对数值为纵坐标，其μR（相对迁移率）为横坐标作标准曲线。根据待测品的μR从标准曲线上查出它们的Mr。高效凝胶排阻色谱（HPSEC）技术测相对分子量HPSEC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，该技术快速、灵敏、高效，对于实验结果的处理与凝胶过滤一样。

固定相的孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。固定相原材料主要有Sw和Pw两种，但一般情况下，仍首先考虑采用Sw型。主要规格有TSK－2000Sw(适合于5000～100000的蛋白多肽)、TSK－4000Sw(适合50000～1000000)等。流动相一般为缓冲液（常用磷酸或醋酸缓冲液），也可含有机溶剂（甲醇或乙腈）和变性剂（尿素、胍、SDS）。

以上简要介绍了多肽类分子量测定的几种常用技术。随着科学技术水平的不断发展，会有许多更新的技术不断涌现，因此这一领域的研究具有广阔的前景。